知母皂苷AⅢ抑制小鼠脑胶质瘤细胞GL261增殖的蛋白质组学研究

作者：常青祺; 陈龙; 袁春露; 廖雅芳; 郭玉刚; 孙辉; 章丹丹^*

来源：上海中医药杂志, 2022, 56(08): 71-78.

DOI：10.16305/j.1007-1334.2022.2112092

• 脑胶质瘤
• 知母皂苷AⅢ
• 蛋白质组学
• CD276
• Wnt信号通路
• 中药研究

目的 利用蛋白质组学技术考察知母皂苷AⅢ抑制小鼠脑胶质瘤细胞GL261(简称“GL261细胞”)增殖的分子机制。方法 (1)将GL261细胞分为空白对照组(知母皂苷AⅢ0μmol/L)和不同剂量知母皂苷AⅢ给药组(1、2、4、6、8、10μmol/L),同时设置溶媒对照组[0.05%二甲基亚砜(DMSO)]和阳性药物组(紫杉醇,1μmol/L),按照分组分别将药液加入含10%胎牛血清(FBS)的达尔伯克改良伊格尔(DMEM)培养基中,混匀依次加入96孔板中,孵育72 h,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测各组细胞存活率。(2)将GL261细胞分为空白对照组、知母皂苷AⅢ给药组(3.5、7μmol/L),按照分组分别将药液加入含10%FBS的DMEM中,混匀后依次加入96孔板中,孵育24 h,采用平板克隆法测定细胞的克隆形成,流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用蛋白质组学技术分析潜在的靶标蛋白和相关的信号通路,并使用蛋白免疫印迹法对关键蛋白进行验证。结果 与空白对照组比较,知母皂苷AⅢ呈剂量依赖性显著抑制GL261细胞活力和克隆形成,同时诱导GL261细胞凋亡(P<0.05)。蛋白质组学结果显示,知母皂苷AⅢ处理GL261细胞后,共有16个差异蛋白,其中5个蛋白上调,11个蛋白下调。基因本体(GO)数据库分析显示,主要生物进程、细胞组成和分子功能集中在增殖调节、生长负调控、细胞器、蛋白质结合、蛋白质同源二聚体活性等。京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库分析显示,主要通路富集在黏蛋白型O-聚糖生物合成、非小细胞肺癌、细菌侵袭表皮细胞、破骨细胞分化、FoxO信号通路、Wnt信号通路、紧密连接、细胞黏附分子、癌症中的蛋白聚糖、Ras信号通路。蛋白质免疫印迹法的结果显示,与空白对照组比较,知母皂苷AⅢ呈剂量依赖性抑制GL261细胞中CD276蛋白及Wnt信号通路中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、原癌基因蛋白(c-Myc)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达(P<0.05)。结论 知母皂苷AⅢ能抑制GL261细胞体外增殖、克隆形成,并诱导GL261细胞凋亡,其机制可能是通过抑制CD276蛋白表达,调控Wnt信号通路,从而发挥其抑制作用。

• 单位
  同济大学附属上海市肺科医院; 上海市虹口区江湾医院; 上海中医药大学