结合流式细胞仪检测技术的菌体原位PCR扩增

作者：吴彩云; 蔡俊鹏; 杨汝德

来源：微生物学报, 2004, (03): 399-401.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.2004.03.030

• 原位聚合酶链式反应(isPCR)
• 流式细胞仪
• 副溶血弧菌(Vp)
• 耐热的直接溶血素基因(tdh) In situ PCR (isPCR)
• Flow cytometry
• Vibrio parahaemolyticus
• Thermostable direct haemolysin(tdh)

建立一套原位PCR检测方法 ,联合流式细胞仪作为检测工具 ,作为基因水平转移研究中的基因监控手段。通过常规PCR反应以确定靶基因的基本扩增参数 ;细菌菌体经过多聚甲醛PBS液固定和溶菌酶处理后进行原位PCR扩增 ,产物洗涤后迅速用流式细胞仪进行荧光检测 ,并辅以荧光显微镜镜检。扩增样品在荧光显微镜的蓝光激发下发出明亮的黄绿色荧光 ,与空白对照中的无扩增菌体的自发荧光可明显区分。流式细胞仪检测结果也显示 ,阴性菌与阳性菌的荧光强度有明显区别。完成了对目标细菌的原位PCR扩增 ,并成功地应用流式细胞仪对原位PCR扩增菌体实施了检测。由此表明isPCR 流式细胞仪检测技术在细菌致病基因原位监控上的应...

• 单位
  华南理工大学