清心通络方通过调控Nrf2/HO-1通路改善小鼠心肌缺血再灌注损伤

作者：陈梦; 杨梦灵; 董亚兰; 胡德胜^*

来源：中西医结合研究, 2023, 15(05): 301-307.

• 心肌缺血再灌注损伤
• 氧化应激
• Nrf2/HO-1通路

目的 研究清心通络方对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响，并探讨其机制是否与调控Nrf2/HO-1信号通路相关。方法 将45只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组和中药组，每组15只。中药组予清心通络方(1.08 g·kg-1·d-1)灌胃给药，余各组予等体积生理盐水(0.2 mL·d-1)灌胃，灌胃处理14 d后通过结扎小鼠左侧冠状动脉左前降支30 min后再灌注构建心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury, MIRI)模型，其中假手术组仅穿线不结扎。采用伊文思蓝和2,3,5-氯化三苯基四氮唑双重染色法测定小鼠心肌缺血和心肌梗死面积；采用生化试剂盒检测小鼠血清肌酸激酶(creatine kinase, CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme, CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)及丙二醛(malondialdehyde, MDA)的水平；采用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)法检测心肌组织白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA相对表达量；采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织PARP-1、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1的蛋白表达。利用H2O2模拟氧化应激损伤细胞模型，采用细胞凋亡试剂盒检测HL-1细胞的凋亡情况。结果 与假手术组相比，模型组小鼠心肌损伤加重，血清CK、CK-MB、LDH、AST水平升高(P均<0.01);与模型组相比，中药组小鼠血清CK、LDH、AST水平均下降(P<0.05或P<0.01),且心梗面积明显减少(P<0.01)。与假手术组相比，模型组小鼠血清中SOD水平下降(P<0.05),MDA含量升高(P<0.01);与模型组相比，中药组小鼠血清SOD水平升高(P<0.01),MDA含量下降(P<0.01)。炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α的mRNA表达在模型组中升高(P均<0.01),中药处理后可显著降低上述炎症因子的mRNA表达(P均<0.01)。模型组心肌组织PARP-1、Bax蛋白表达较假手术组升高(P均<0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达则下降(P均<0.01);与模型组相比，中药组心肌组织PARP-1、Bax蛋白表达量减少(P均<0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达量增加(P均<0.05)。此外，H2O2处理后的HL-1细胞凋亡明显增加(P<0.01),不同浓度中药均可明显减少H2O2导致的细胞凋亡(P<0.01)。结论 清心通络方通过减轻炎症和氧化应激改善MIRI,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院