二十碳五烯酸通过抑制MGMT表达提高胶质瘤U87细胞对替莫唑胺的化疗敏感性

作者：黄天造; 陈祥荣^*; 刘楚斌; 高延磊; 胡伟鹏

来源：中华神经医学杂志, 2018, 17(09): 879-885.

• 神经胶质瘤
• 二十碳五烯酸
• 替莫唑胺
• DNA错配修复酶
• 核因子κB

目的探讨二十碳五烯酸(EPA)对胶质瘤U87细胞替莫唑胺(TMZ)化疗敏感性的影响及其机制。方法(1)体外常规培养U87细胞,加入0、25、50、100、200μmol/LEPA分别作用12、24、48 h后MTT检测细胞增殖率;(2)将U87细胞分为对照组、EPA组、TMZ组、EPA+TMZ组(EPA、TMZ的浓度分别为25、100 mol/L,EPA预处理时间为12、24或48 h,TMZ作用时间为24 h),MTT检测4组细胞的增殖抑制率;(3)将U87细胞分为对照组、EPA组、TMZ组、EPA+TMZ组(EPA、TMZ的浓度分别为25、100mol/L,作用时间分别为12、24h)。流式细胞术检测4组细胞凋亡率;Western blotting检测细胞活化半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,DNA错配修复酶(MGMT)及核因子κB(NF-κB)p65、NF-κB抑制蛋白(IKBα)的表达;免疫荧光染色检测细胞MGMT和NF-κBp65的表达;甲基化特异性PCR(MSP)法检测细胞MGMT基因启动子甲基化水平。结果 (1)50、100、200μmol/L EPA作用12、24、48 h时对U87细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性;(2)与同样预处理时间的TMZ组比较,EPA+TMZ组U87细胞的增殖抑制率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);(3)流式细胞术检测显示:与TMZ组[(34.58±4.35)%]比较,EPA+TMZ组U87细胞的凋亡率[(53.28±5.05)%]明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);Western blotting检测显示:与TMZ组比较,EPA+TMZ组U87细胞活化caspase-3、Bax和IKBα蛋白表达升高,MGMT和NF-κBp65蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色显示EPA+TMZ组细胞MGMT和NF-κB p65蛋白的表达低于TMZ组;MSP检测显示EPA+TMZ组U87细胞MGMT基因启动子甲基化水平高于TMZ组。结论EPA预处理可提高胶质瘤U87细胞对TMZ的化疗敏感性,其机制可能是通过下调NF-κB信号通路抑制MGMT表达来实现。

• 单位
  福建医科大学附属第二医院