H4亚型禽流感血凝素单克隆抗体的研制及夹心ELISA的建立

作者：邓显文; 罗思思; 谢芝勋^*; 黄娇玲; 张民秀; 谢志勤; 谢丽基; 范晴; 王盛; 曾婷婷; 张艳芳

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2020, 36(01): 69-74.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008959

• 禽流感病毒
• H4亚型
• 血凝素
• 单克隆抗体(mAb)

目的制备H4亚型禽流感病毒(AIV)血凝素单克隆抗体(mAb),基于mAb建立H4亚型AIV夹心ELISA检测方法。方法用灭活H4亚型AIV免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、血凝抑制(HI)试验筛选和亚克隆,得到了一株抗H4亚型AIV mAb(6G4)。免疫荧光细胞化学染色和Western blot法验证6G4与H4亚型AIV的反应性, HI试验鉴定6G4特异性、广谱性和稳定性,试剂盒鉴定6G4亚类。以鸡抗H4亚型AIV多克隆抗体作为包被抗体, 6G4作为捕获抗体, HRP标记的山羊抗小鼠IgG作为酶标抗体,通过条件优化和一系列验证,建立H4亚型AIV夹心ELISA检测方法。结果 6G4亚类为IgG1,轻链为κ链,能稳定分泌抗体,具有良好的反应性、特异性、广谱性和稳定性;基于6G4建立的ELISA特异性强、敏感性高、重复性好,适合大批量检测。结论成功制备了抗H4亚型AIV的mAb,建立了检测H4亚型AIV的夹心ELISA。

• 单位
  广西壮族自治区兽医研究所