天麻蛋白对OGD/R诱导的HT22细胞损伤的保护作用及机制研究

作者：杨丽萍; 童英; 陈普; 段小花

来源：世界科学技术-中医药现代化, 2023, 25(04): 1367-1374.

DOI：10.11842/wst.20220509007

• 天麻蛋白
• OGD/R
• HT22细胞
• 凋亡
• 神经保护

目的 研究天麻蛋白对氧糖剥夺/复糖复氧（OGD/R）诱导的HT22细胞损伤的保护作用及机制。方法 将体外HT22细胞常规培养，生长至对数生长期后铺板并随机分为对照组、OGD/R组、依达拉奉组、天麻蛋白组。以连二亚硫酸钠（Na2S2O4）10 mmol·L-1合并无糖DMEM培养基造成氧糖剥夺培养2 h，继而恢复为无血清高糖DMEM培养2 h进行复糖复氧处理，以建立体外OGD/R模型。依达拉奉和天麻蛋白为自氧糖剥夺前24 h开始即加入相应药物终浓度，持续至复糖复氧结束。采用MTT法检测细胞存活率，乳酸脱氢酶（LDH）法测定LDH泄露率，试剂盒测定超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性，丙二醛（MDA）含量及活性氧（ROS）水平，流式细胞技术Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡，Western blot检测OGD/R诱导损伤的HT22细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3、p-AMPK、AMPK、Nrf2、Nrf2入核、HIF-1 α、VEGF蛋白表达水平变化。结果 与对照组相比，OGD/R组细胞存活率下降（P<0.01）,LDH泄露率升高（P<0.01）,SOD、GSH-PX活性下降（P<0.01）,MDA含量及ROS水平增加（P<0.01），细胞凋亡率增加（P<0.01）,Bcl-2蛋白的表达量下降（P<0.01）,Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达量升高（P<0.01）；与OGD/R组相比，天麻蛋白可提高细胞存活率（P<0.01），降低LDH泄露率（P<0.01），提高SOD活性及GSH-PX活性（P<0.01），降低MDA含量及ROS水平（P<0.01），降低细胞凋亡率（P<0.01），上调HT22细胞中Bcl-2、p-AMPK、Nrf2入核、HIF-1 α、VEGF蛋白的表达量（P<0.01），有效抑制Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达（P<0.01）。结论 天麻蛋白对HT22细胞OGD/R损伤具有神经保护作用，其机制与活性氧/线粒体凋亡通路、AMPKNrf2通路和缺氧诱导因子通路相关蛋白密切相关。

• 单位
  云南中医药大学