猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作者：汪倩倩; 王世敏; 王乾飞; 袁凤玲; 何威; 李丽竹; 周必英^*

来源：中华地方病学杂志, 2023, 42(09).

• 猪带绦虫
• 猪囊尾蚴
• 排泄分泌抗原
• 富含亮氨酸重复序列结构域15蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

目的构建猪带绦虫重组质粒pET30a-富含亮氨酸重复序列(LRR)结构域15(LRRC15), 原核表达纯化的LRRC15重组蛋白, 制备兔多克隆抗体。方法采用全基因合成方法, 获得猪带绦虫LRRC15蛋白编码基因;将其克隆至pET30a载体, 构建重组质粒pET30a-LRRC15, 并进行双酶切PCR鉴定;将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞, 用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达LRRC15重组蛋白, 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析鉴定表达产物;用Ni-IDA亲和层析柱纯化LRRC15重组蛋白, SDS-PAGE进行分析鉴定;蛋白质印迹法(Western blot, WB)鉴定纯化重组蛋白特异性;用纯化的LRRC15重组蛋白免疫新西兰兔, 制备LRRC15多克隆抗体, 用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定纯化多克隆抗体的效价。结果经PCR鉴定, 扩增出长度为1 506 bp的条带, 与LRRC15基因相符;经SDS-PAGE和WB鉴定, 获得相对分子质量(Mr)约为55.36 × 103的LRRC15目的蛋白;用LRRC15重组蛋白免疫新西兰兔, 获得LRRC15多克隆抗体, 其效价为1∶1 587 200。结论成功构建重组质粒pET30a-LRRC15, 制备出猪带绦虫LRRC15重组蛋白, 并获得了高纯度、高效价的LRRC15重组蛋白兔抗多克隆抗体。

• 单位
  遵义医科大学; 第一临床学院