氯化钴诱导体外人髓核细胞缺氧模型的建立

作者：李欣怡; 王洪伸; 谭傲威; 吴浩杰; 李永津; 陈博来

来源：广东医学, 2023, 44(06): 729-734.

DOI：10.13820/j.cnki.gdyx.20230669

• 氯化钴
• 椎间盘
• 髓核细胞
• 缺氧模型
• 缺氧诱导因子-1α
• 血管内皮生长因子

目的 观察氯化钴（CoCl2）对体外培养的原代髓核细胞的影响，探寻符合研究目的体外化学干预低氧模型。方法 利用贴壁法培养原代髓核细胞，使用100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L CoCl2溶液分别处理12 h、24 h、36 h、48 h,形成最终13个分组：空白对照组，CoCl2处理组（100μmol/L-12 h组，100μmol/L-24 h组，100μmol/L-36 h组，100μmol/L-48 h组；200μmol/L-12 h组，200μmol/L-24 h组，200μmol/L-36 h组，200μmol/L-48 h组；300μmol/L-12 h组，300μmol/L-24 h组，300μmol/L-36 h组，300μmol/L-48 h组）。利用CCK-8实验观察不同条件下细胞生长、凋亡情况，并通过免疫印迹（western blot）及实时定量聚合酶链反应（qPCR）检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况。结果 与空白对照组比较，CoCl2处理组的细胞生存率整体趋势随着浓度升高、时间延长而降低（P2诱导下，髓核细胞的生存率反而提高（P2浓度升高和时间延长而增加（P2的诱导下，HIF-1α、VEGF蛋白的表达进入平台期。结论 CoCl2对原代髓核细胞的增殖、凋亡及相关基因、蛋白的表达与时间和浓度相关，总体成逐渐升高趋势。本文成功建立起一种体外培养原代髓核细胞缺氧诱导方法，可以作为研究椎间盘髓核细胞缺氧模型的参考。

• 单位
  广东省中医药科学院; 广东省中医院