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摘要
目的 探讨热休克蛋白22(heat shock protein 22, Hsp22)对苯肾上腺素(phenylephrine, PE)诱导的心肌细胞肥大反应的作用。方法 在郑州大学附属第一医院心血管实验室分离培养原代大鼠心肌细胞,将培养的心肌细胞随机分为对照组、刺激组、1 μg/mL Hsp22的处理组、10 μg/mL Hsp22的处理组；采用PE刺激诱导心肌细胞肥大反应,用不同浓度的人重组Hsp22孵育心肌细胞,对每组细胞通过MTT法检测细胞存活率；通过α-肌动蛋白免疫荧光检测心肌细胞面积；采用DCFH-DA荧光探针检测活性氧的水平；TUNEL染色检测细胞凋亡数量；应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肥厚标志物的转录；免疫印迹检测信号通路的改变。使用SPSS 13.0进行统计分析,计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,所有数据均使用单因素方差分析检测各组间的差异,组间两两比较采用LSD-t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 不同浓度的Hsp22对心肌细胞活性没有影响(F=6.622,P>0.05)；PE刺激明显增加心肌细胞面积(t=16.01,P<0.05),增加心肌肥厚标志物心房利钠肽(t=44.84,P<0.05),B型利钠肽(BNP)(t=16.85,P<0.05),肌球蛋白重链β(β-MHC)(t=41.53,P<0.05)的转录水平,增加心肌细胞氧化应激水平(t=43.61,P<0.05),增加心肌细胞凋亡数量(t=60.82,P<0.05)。不同浓度的Hsp22处理明显减小心肌细胞面积[PE+1 μg/mL Hsp22组：(3 872±212)μm2,t=4.018,P<0.05；PE+10 μg/mL Hsp22组：(2 563±287)μm2,t=10.80,P<0.05]；减少肥厚标志物ANP、BNP、β-MHC的转录水平(均P<0.05),减少心肌细胞氧化应激水平(均P<0.05)；减少心肌细胞凋亡数量[PE+1 μg/mL Hsp22组：(21.7±1.2)%,t=20.02,P<0.05；PE+10 μg/mL Hsp22组：(19.8±1.6)%,t=24.70,P<0.05]。免疫印迹结果显示,PE刺激组AMPKα的磷酸化减少(t=7.75,P<0.05),mTOR的磷酸化增加(t=25.22,P<0.05)；不同浓度的Hsp22增加AMPKα的磷酸化(均P<0.05),减少mTOR的磷酸化(均P<0.05)。结论 Hsp22通过激活AMPKα抑制心肌细胞肥大反应,Hsp22可以作为治疗心肌肥厚的新药物。
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单位郑州大学; 第一附属医院心血管内科; 郑州大学第一附属医院
