利用单线虫两重PCR技术对秀丽隐杆线虫线粒体DNA拷贝数进行相对定量的方法

作者：高玉晓; 吴永红; 叶巧; 李志慧; 张成岗

来源：军事医学, 2013, (07): 543-546.

• 单线虫
• 两重PCR
• 线粒体DNA
• DNA拷贝数 single nematode
• two-plex PCR
• mitochondrial DNA
• DNA copy number

目的基于单线虫两重PCR技术,利用细胞核DNA(nDNA)作为内参研究秀丽隐杆线虫线粒体相对数量的实验条件,进而建立一种相对定量秀丽隐杆线虫线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的方法。方法首先以秀丽隐杆线虫nDNA和mtDNA序列为模板,利用多重PCR引物设计软件MPprimer和引物特异性评估软件MFEprimer V2.0设计两重PCR引物;然后针对以单线虫为PCR扩增模板的处理条件进行摸索,包括蛋白酶K的消化浓度及反应时间;最后研究秀丽隐杆线虫nDNA片段和mtDNA片段扩增后到达平台期的时间,进而比较不同循环数扩增下秀丽隐杆线虫线粒体拷贝数相对定量的可行性。结果单线虫经蛋白酶K 60℃消化...

• 单位
  蛋白质组学国家重点实验室; 安徽医科大学; 基础医学院; 军事医学科学院放射与辐射医学研究所