MSTN基因siRNA表达载体的构建和鉴定

作者：孙顺昌; 林志坚; 陈卫东; 贺敬波; 彭运生

来源：医学分子生物学杂志, 2009, 6(1): 13-16.

DOI：10.3870/j.issn.1672-8009.2009.01.004

• MSTN基因
• RNA干扰
• 载体
• 构建

目的 构建能沉默MSTN基因的小干扰RNA表达载体,并鉴定它沉默肌母细胞MSTN基因的效率.方法 合成3对发夹小干扰RNA模板寡核苷酸链,退火后插入pSilencer载体,构建成可沉默MSTN基因的小干扰RNA表达载体,通过酶切和测序鉴定构建的小干扰RNA表达载体.将小干扰RNA表达载体转染肌母细胞,用实时荧光定量RT-PCR和Western印迹检测转染的肌母细胞myostatin的表达水平.结果 酶切和测序证实3个小干扰RNA表达载体构建正确,实时荧光定量RT-PCR显示所构建的3个小干扰RNA表达载体对肌母细胞MSTN基因的干扰率分别为43.6 %、47.7 %和81.6 %,它们的干扰效果被Western印迹所证实.结论 干扰率为81.6 %的小干扰RNA表达载体为构建成功的小干扰RNA表达载体,它可用作MSTN基因的功能研究和肌病治疗的分子研究.

• 单位
  北京大学深圳医院; 神经内科; 深圳市宝安区人民医院