猪圆环病毒2型可视化RPA快速检测方法的建立

作者：陈思楠; 王金凤; 张倩; 刘立兵; 顾文源; 马宏伟; 王建昌; 韩庆安^*; 石玉祥^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(03): 304-309.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0056

• 猪圆环病毒2型
• cap基因
• LFS-RPA
• 可视化
• 快速检测

本研究针对猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)的cap基因保守序列，设计特异性RPA引物和nfo探针，建立了一种快速检测PCV2的基于侧流层析试纸条的可视化RPA方法(lateral flow strip RPA,LFS-RPA)。结果，建立的LFS-RPA方法最佳反应条件是39℃恒温扩增20 min，可在5 min内实现对检测结果的肉眼可视化判定；该方法特异性强，仅对PCV2出现阳性扩增，对本研究涉及的其他猪重要病原均无交叉反应；以含PCV2全长序列的重组质粒为模板，LFS-RPA的检出限为10 copies/μL。进一步应用建立的LFS RPA方法对30份猪临床样品进行PCV2检测，并与real-time PCR方法进行比较，结果显示两种方法的检测一致性达86.7%(26/30)，其中4份Ct值在36～38之间的临床样品利用LFS-RPA方法检测为阴性。上述结果表明，本研究建立的LFS-RPA方法操作简单，对仪器设备要求低，可以快速且直观的实现对检测结果的判断，可以满足现场检测的要求，对养猪场一线PCV2快速诊断和防控具有重要现实意义。

• 单位
  河北工程大学; 生命科学与食品工程学院