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摘要
本发明公开一种基于CRISPR/Cas12a和恒温扩增的DENV一步法核酸检测方法,属于生物技术领域。本发明设计的crRNA与DENV-1靶序列的识别结合具有高度特异性,有效保证检测结果的准确性。本发明设计的crRNA不受PAM序列的限制,只能特异性识别剪切单链DNA,而不能剪切双链DNA,因此Cas12a蛋白不会消耗用于扩增的模板,扩增与Cas12a-crRNA检测可在同一体系同时进行,实现了高灵敏度。本发明只需要常温下40min便可通过试纸条显色或荧光强度读取检测结果,检测时间短,不需要昂贵、复杂的控温仪器,只需要一个恒温装置和荧光检测设备便可完成检测反应,检测成本低。
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