齿兰环斑病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备

作者：万晴姣; 刘倩; 李欲轲; 龚记熠; 张宇斌; 乙引; 洪鲲^*

来源：植物病理学报, 2019, 49(01): 20-26.

DOI：10.13926/j.cnki.apps.000240

• 齿兰环斑病毒
• RdRp
• 原核表达
• 多克隆抗体

采用RT-PCR法从感染齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)贵州分离物的苋色藜叶片中扩增出病毒的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因保守序列。测序结果显示,该保守片段长516bp,编码171个氨基酸残基。构建了该片段的原核表达载体pET32a-ORSV RdRp并转化BL21(DE3)菌株,在25℃以0.4mmol·L-1IPTG诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为36 kDa,与预测相符合。将该重组蛋白作为抗原免疫BABL/C小鼠,制备的多克隆抗体效价达1∶102 400。间接ELISA结果表明,该多抗具有较强的特异性,能检测到ORSV感染的病叶汁液中的RdRp,而与其它感染4种同属或不同属病毒的病叶汁液不发生血清学交叉反应,本实验为进一步研究RdRp的结构和功能以及从分子水平上探讨该病毒的致病机制奠定基础。

• 单位
  生命科学学院; 贵州师范大学