高效液相色谱法研究年龄和缺血对大鼠心肌线粒体心磷脂含量的影响

作者：邵海军; 李敬远; 邵珠民; 范建伟; 曾因明

来源：中国药理学通报, 2008, (03): 343-347.

• 心磷脂
• 正相高效液相色谱
• 脂质

目的建立大鼠心肌线粒体膜心磷脂(CL)定量分析的方法;同时利用该法研究年龄和缺血对大鼠心肌线粒体膜CL含量的影响。方法不同年龄(4、12、24mon)♂SD大鼠各24只,同一年龄大鼠随机分为3组(n=8)。对照组于Langendorff模型上用Krebs-Henseleit缓冲液(KH液)灌注70min;缺血组于Langendorff模型利用KH液平衡灌注20min,然后停止灌注30min或40min,最后再灌注20min。分别提取心肌细胞肌纤维膜下线粒体(subsarcolemmal mitochondria,SSM)和肌纤维间线粒体(interfibrillar mitochondria,IFM)脂质。高效液相色谱法(High-performance liquid chromatogra-phy,HPLC)采用正相色谱柱梯度洗脱对CL进行分离和定量分析。结果在所建立的方法学下,CL的保留时间为13092min;标准曲线为Y^(μVs)=20877455X(mmolL-1)-352028(r=09993),在02~32mmolL-1浓度范围内呈良好的线性关系,最低检测浓度为0005mmolL-1(S/N=3);在02、08、32mmolL-1低、中、高3个浓度下的绝对回收率为08505~09519,相对回收率为09898~10429;日内及日间RSD均小于011(n=5)。24mon未缺血大鼠心肌SSM膜上CL含量比4mon大鼠低(P<005),也比12mon大鼠低(P<005);但3种年龄未缺血大鼠IFM膜上CL含量差异无显著性。3种年龄大鼠缺血30min组和缺血40min组心肌SSM膜上CL含量比未缺血组低(P<001),而缺血30min组和缺血40min组间CL含量差异无显著性。3种年龄大鼠正常组、缺血30min组和缺血40min组IFM膜上CL含量之间差异均无显著性。结论正相梯度洗脱可满足对大鼠心肌线粒体心磷脂的分离和定量的要求。大鼠心肌SSM膜上CL对老龄和缺血较敏感,而老龄和缺血对IFM膜上的CL无明显影响。