小鼠永生化心内膜细胞系的建立与鉴定

作者：许飞; 张慧^*

来源：中国分子心脏病学杂志, 2023, 23(02): 5318-5325.

DOI：10.16563/j.cnki.1671-6272.2023.04.013

• 细胞分离
• 细胞模型
• 心内膜
• 永生化

目的 构建小鼠心内膜体外培养模型，促进心内膜在心脏损伤和修复中的机制研究。方法 利用酶消化法获得心室游离壁原代心内膜细胞，利用RT-qPCR和免疫荧光对心内膜相关标志物进行鉴定；之后通过SV40-LT-GFP-PURO慢病毒感染分离得到的原代心内膜细胞，经过嘌呤霉素筛选、传代扩增、CD31磁珠分选纯化后，获得永生化的小鼠心内膜细胞系，并对其进行形态学评估、分子标志物检测和功能学验证。结果 分离得到的原代心内膜细胞呈现鹅卵石样细胞形态，表达心内膜特异性基因和蛋白，但是数量少且传代次数有限。永生化的小鼠心内膜细胞系表达心内膜特异性基因，保留了体外血管生成和乙酰化低密度脂蛋白摄取的功能特性，且能维持与原代心内膜相似的鹅卵石样形态至少传代15次。结论 本研究成功构建了能多次传代且保留心内膜特异性基因表达特征和内皮细胞功能特性的小鼠永生化心内膜细胞系。

• 单位
  心血管疾病国家重点实验室; 国家心血管病中心; 北京协和医学院; 中国医学科学院阜外医院