HL-60细胞中ICAT基因沉默对Wnt信号通路及NSC67657诱导细胞分化的影响

作者：王伟佳; 陈康; 王娟; 黄云秀; 张德才

来源：中华血液学杂志, 2017, 38(11): 972-976.

• HL-60细胞
• β-catenin相关蛋白1
• 分化
• Wnt信号通路

目的探讨β-catenin相关蛋白1(ICAT)沉默对Wnt信号通路及甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化的影响。方法 NSC67657诱导HL-60细胞分化,流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD14的表达,检测细胞分化程度;构建慢病毒LV-ICAT-RNAi载体,感染HL-60细胞,采用荧光实时定量PCR和Western blot技术检测感染前后ICAT基因和蛋白表达情况,判断干扰效果;采用免疫共沉淀技术检测β-catenin与ICAT蛋白在细胞内的相互作用;采用Western blot技术分析NSC67657诱导非感染HL-60细胞(HL-60v组)和LV-ICAT-RNAi载体感染HL-60细胞(HL-60i组)前后Wnt/β-catenin通路下游靶点Cyclin D1、TCF-1和c-Jun的表达情况;NSC67657分别作用HL-60v组和HL-60i组细胞24 h,采用瑞氏染色、透射电子显微镜、流式细胞术观察细胞分化情况。结果 10μmol/L NSC67657可以诱导HL-60细胞向单核系分化,连续诱导5 d后,CD14+细胞比例为(92.30±5.14)%;HL-60i细胞ICAT mRNA表达(0.07±0.01)明显低于HL-60v组(1.00±0.08)(P=0.002)(平均敲减效率为93.2%),Western blot结果与PCR结果一致(P=0.001);免疫共沉淀结果显示,ICAT与β-catenin蛋白在细胞分化前后都存在相互作用,药物诱导细胞分化后两者相互作用条带吸光度明显增加。药物作用HL-60i细胞Wnt信号通路下游靶蛋白Cyclin D1、TCF-1和c-Jun表达明显高于HL-60v组,但低于非药物处理组。NSC67657作用HL-60i细胞CD14+细胞比例为(8.33±3.14)%,明显低于HL-60v组的(19.08±4.73)%,但仍高于非药物处理非感染HL-60细胞组(0.60±0.03)%(F=119.24,P=0.010),细胞形态和超微结果符合细胞表面分化抗原检测结论。结论 ICAT蛋白参与了NSC67657诱导HL-60细胞的单核系分化,Wnt/β-catenin信号通路可能起到桥梁作用。

• 单位
  中山市人民医院