延边牛骨骼肌卫星细胞的分离培养及诱导分化

作者：孙建富; 张军芳; 唐琳; 孙斌; 王英; 崔岩; 王恩泽; 李强; 李香子^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2021, (12): 47-152.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2020.11.0324

• 延边牛
• 骨骼肌卫星细胞
• 分离
• 培养
• 诱导分化

为建立体外研究延边牛肌肉分化及成脂相关调控过程的牛骨骼肌卫星细胞原代细胞模型,试验以12日龄延边牛犊牛背最长肌为材料,利用链霉蛋白酶消化和差速贴壁法对延边牛骨骼肌卫星细胞进行分离纯化,期间观察细胞形态变化;利用免疫荧光染色法对特异性标记基因配对盒基因7(Pax7)、结蛋白(Desmin)和成肌分化抗原(MyoD)进行检测鉴定分离细胞;绘制细胞生长曲线;细胞进行成肌诱导分化,利用荧光定量PCR鉴定Pax7和MyoD基因在诱导前后表达量的变化。结果表明:刚分离的骨骼肌卫星细胞贴壁生长后,细胞由圆形向梭形或纺锤形变化,随着培养时间的延长,细胞开始有序生长;骨骼肌卫星细胞特异性标记基因Pax7、Desmin、MyoD免疫荧光染色均呈阳性表达;骨骼肌卫星细胞符合正常的生长规律;细胞成肌诱导分化后,MyoD、Pax7基因在诱导成肌的各阶段均有表达,表明诱导后骨骼肌卫星细胞处于活化状态并向成肌细胞分化。说明本研究成功分离获得了延边牛骨骼肌卫星细胞,可为研究延边牛肌肉分化及成脂相关调控过程提供体外细胞模型。

• 单位
  延边大学