TPT1-AS1靶向调控微小RNA-30c-5p及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响

作者：陈艳妮; 吴永丰; 侯孝涛

来源：临床肿瘤学杂志, 2020, 25(12): 1084-1090.

• 结直肠癌
• 肿瘤蛋白翻译调节因子1反义RNA 1
• 微小RNA-30c-5p
• 侵袭迁移

目的探讨长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1反义RNA 1(TPT1-AS1)对微小RNA-30c-5p(miR-30c-5p)的靶向调控作用及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测结直肠癌组织相较于癌旁组织及结直肠癌细胞(DLD-1、HCT116、SW480和LoVo)相较于人正常结肠上皮细胞HCoEpiC的TPT1-AS1水平。脂质体法向LoVo细胞转染TPT1-AS1特异性siRNA(si-TPT1-AS1组)并设转染si-NC的阴性对照组和未转染的空白对照组,qPCR检测TPT1-AS1和miR-30c-5p水平,MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞活性、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶3(MMP-3)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)及其磷酸化形式p-STAT3的水平,在线预测并结合双荧光素酶报告实验验证miR-30c-5p与TPT1-AS1的相互作用关系。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织的TPT1-AS1水平升高至2020±0080,而miR-30c-5p水平降低至0597±0044(P<005),且结直肠癌组织的TPT1-AS1水平与miR-30c-5p水平呈负相关(r=-0801,P<0001)。4株结直肠癌细胞的TPT1-AS1水平均表现为异常高表达(P<005),功能验证实验选择TPT1-AS1表达最高的LoVo细胞。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组LoVo细胞活力减弱,TPT1-AS1水平降低而miR-30c-5p水平升高(P<005)。si-TPT1-AS1组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(18650±3346)%和(108326±17383)个,均低于空白对照组的(90963±4328)%和(275675±21078)个及阴性对照组的(93165±4317)%和(281431±23880)个(P<005)。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组的STAT3水平无显著变化,而p-STAT3和MMP-3水平降低(P<005)。MiR-30c-5p模拟物降低了野生型TPT1-AS1的荧光素酶活性(P<005),而不影响突变型TPT1-AS1的荧光素酶活性。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异均无统计学意义(P>005)。结论结直肠癌中TPT1-AS1高表达,且增强了结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,TPT1-AS1可能通过靶向miR-30c-5p来发挥促癌作用。TPT1-AS1的发现为结直肠癌的诊治和预后评估及下一步的转化研究提供了新的思路。

• 单位
  东南大学附属中大医院