基于In-fusion技术的高通量HIV表型耐药检测系统的建立及应用研究

作者：吴守丽; 刘峰; 颜苹苹; 王征桦; 谢美榕; 严延生^*

来源：中国人兽共患病学报, 2019, 35(04): 285-291.

• 人类免疫缺陷病毒
• 假病毒
• 表型耐药性检测
• 基因型耐药性检测

目的构建基于In-fusion技术的高通量新型HIV表型耐药检测系统,用于临床表型耐药检测。方法扩增LacZ基因,插入并替换原骨架质粒pLWJ-SV40-Luc中耐药检测片段构建新的骨架质粒pLWJ-SV40-Luc-LacZ,利用In-fusion定向克隆技术,将耐药检测片段插入到改造后的骨架质粒中构建耐药检测载体(RTV),并与膜蛋白表达质粒VSV-G共转染293T细胞产生HIV假病毒,在药物干预下,通过检测感染细胞中Luc+表达量来反应其对药物的敏感性。结果成功引入蓝白斑筛选改造出新的骨架质粒pLWJ-SV40-Luc-LacZ。36例临床检测样本成功扩增出30例,利用In-fusion无缝连接技术成功构建26例RTV,其中21株产生的假病毒具有活性。药物敏感性实验结果显示所得的假病毒表型耐药检测结果与基因型耐药解释结果完全一致。结论成功构建出基于In-fusion技术的高通量新型HIV表型耐药检测系统,可应用于临床耐药检测,以指导临床抗病毒治疗。

• 单位
  福建省疾病预防控制中心; 公共卫生学院; 福建医科大学