猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性纳米抗体的原核表达研究

作者：王长江; 曲光刚^*; 武曰星; 赵中伟; 郭广君; 全洪坤; 韩强; 沈志强^*

来源：中国兽药杂志, 2020, 54(05): 10-17.

• 猪圆环病毒2型
• 纳米抗体
• 原核表达
• ELSIA效价

为利用大肠埃希菌表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白特异性纳米抗体,并对其抗原结合活性进行鉴定,以Cap蛋白特异性纳米抗体基因(vhhcap)序列为模板,利用Primer 5.0软件设计一对通用vhhcap特异性扩增引物,通过PCR方法扩增vhhcap基因片段,经双酶切处理后分别克隆到pCold-SUMO和pET-32a(+)载体上,转化宿主菌E.coli BL21(DE3),使用IPTG进行诱导表达,表达产物通过Ni2+亲和层析柱进行纯化,经SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定,同时使用ELISA方法对两种载体表达的纳米抗体ELISA效价进行检测和对比分析。SDS-PAGE结果显示pCold-SUMO和pET-32a(+)载体均能实现VHHcap纳米抗体重组蛋白的原核可溶性表达,Western blotting表明纳米抗体重组蛋白可通过6×His-Tag进行检测;ELISA结果显示pCold-SUMO载体表达的纳米抗体重组蛋白效价为1∶500,ELISA效价明显高于pET-32a(+)载体表达产物。PCV2 Cap特异性纳米抗体成功表达为PCV2检测及治疗用新型的抗体开发奠定了基础。

• 单位
  山东省滨州畜牧兽医研究院; 中国农业大学