Flag-ALD融合载体构建及蛋白表达

作者：曹欣; 唐燕琼; 李宏; 马香^*; 刘柱

来源：热带生物学报, 2020, 11(02): 132-155.

DOI：10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.02.002

• 丙氨酸脱氢酶
• 基因克隆
• 重组质粒
• 蛋白表达

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)是感染鱼类的最常见致病菌之一,为了解维氏气单胞菌中丙氨酸脱氢酶(alanine dehydrogenase,ALD,EC 1.4.1.1)的调控功能,笔者通过分子克隆获得Flag-ALD融合表达载体,并在大肠杆菌中大量表达该蛋白。即以维氏气单胞菌C4基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增获得N端带有Flag标签的ald基因,将带有标签的目的基因与原核表达载体pACYCDuet连接,并将重组质粒pACYCDuet-Flag-ald转化到大肠杆菌(E.coli)BL21中。添加异丙基-β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷(Isopropylbeta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组蛋白大量表达。SDS-PAGE分离与Western blot结果表明,来源于维氏气单胞菌的Flag-ALD重组蛋白在E.coli中以可溶性形式成功表达。本实验构建的Flag标记靶标蛋白可为研究丙氨酸脱氢酶在维氏气单胞菌中的功能以及在生物抑菌剂方面的应用提供技术支持。

• 单位
  海南大学