骨肉瘤细胞中Polo样激酶3的表达和定位

作者：沈涛; 陈之光; 李妍; 巴根; 郭然; 杨蕾; 郭洲洋; 付勤

来源：现代肿瘤医学, 2017, 25(08): 1171-1174.

DOI：10.3969/j.issn.1672-4992.2017.08.001

• hPlk3
• Western blot
• 免疫沉淀

目的:构建新型人源真核表达载体3*Flag-hPlk3并同时检测其在骨肉瘤细胞U2OS中的表达及定位。方法:以GST-hPlk3作为模板,利用聚合酶链反应扩增人源Plk3目的基因c DNA全长,并将其克隆到含有3*Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序分析鉴定,并转染至U2OS骨肉瘤细胞系中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。同时利用荧光共聚焦激光扫描显微镜观察3*FlaghPlk3在U2OS细胞系中的定位,进一步利用免疫沉淀方法纯化人源Plk3蛋白。结果:hPlk3基因c DNA全长成功构建于含有3*Flag标签的真核表达载体中,Western blot检测3*Flag-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为74k Da。3*Flag-hPlk3在骨肉瘤细胞系U2OS中主要定位于细胞质及核周,并成功纯化了hPlk3蛋白。结论:成功的构建了含有3*Flag标签的人源Plk3真核表达质粒,同时鉴定3*Flag-hPlk3融合蛋白的表达,最终成功纯化hPlk3蛋白。3*Flag-hPlk3蛋白主要定位在细胞质和核周。

• 单位
  中国医科大学; 中国医科大学附属盛京医院; 基础医学院