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摘要
目的 探究枸杞多糖(LBP)通过调控miRNA-29b/丝裂原活化蛋白激酶1(miR-29b/MAPK1)对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞(HREC)凋亡的影响。方法 加入(100、200、400、800)mg/L LBP以及使用LipofectamineTM2000转染inhibitor NC和miR-29b inhibitor至高糖处理的HREC损伤模型中进行干预处理。随后，采用CCK-8检测细胞活力；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-29b、MAPK1 m RNA水平；Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡情况；2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平；蛋白质免疫印迹法检测细胞中MAPK1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达变化。双荧光素酶实验验证miR-29b与MAPK1的靶向关系。结果 与对照组相比，高糖组细胞A450值、miR-29b水平降低(P<0.05),MAPK1 mRNA水平升高(P<0.05)；在高糖基础上添加LBP，随着LBP浓度增加，A450升高(分别为0.42±0.003,0.52±0.023,0.67±0.042和0.78±0.051)(P<0.05)、miR-29b水平逐渐升高(分别为0.42±0.29,0.57±0.27,0.63±0.29,0.78±0.51,P<0.05),MAPK1 mRNA水平则逐渐降低(1.67±0.61,1.53±0.29,1.41±0.27,1.32±0.73)(P<0.05)。与对照组相比，高糖组细胞活力、miR-29b水平，Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),MAPK1 mRNA和蛋白水平，ROS水平，Bax、Caspase-3蛋白水平升高(P<0.05)；与高糖组相比，在加入LBP干预处理的细胞中上述现象得到逆转；进一步发现，在LBP基础上联合miR-29b inhibitor，发现细胞活力、miR-29b水平，Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),MAPK1 m RNA和蛋白水平，凋亡率，ROS水平，Bax、Caspase-3蛋白水平升高(P<0.05)。此外，MAPK1 m RNA的3’UTR含有miR-29b序列保守碱基，且经双荧光素酶实验得到证实。结论 LBP能够上调miR-29b的表达，来降低MAPK1表达，进而抑制高糖导致的HREC凋亡发生。
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