霍乱弧菌三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作者：万莹; 陈永军; 任亚玲; 王亚磊; 王权^*; 蒋蔚^*

来源：中国兽医科学, 2019, 49(09): 1143-1151.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0154

• 霍乱弧菌
• ctx
• hly
• ompW
• 三重荧光定量PCR

为建立一种基于TaqMan探针法定量检测霍乱弧菌的三重荧光定量PCR方法,以霍乱弧菌种特异性基因ompW和毒力基因ctx、hly为靶基因,分别设计特异性引物及相应的TaqMan探针。在ompW、ctx、hly探针的5’端分别标记CY5、FAM、HEX荧光报告基团,3’端均标记BHQ1荧光淬灭基团。结果显示,本试验建立的三重荧光定量PCR方法与其他菌株无交叉反应,其最低检出限达到了10 CFU/m L,重复性试验中每组变异系数均小于1.4%;检测人工染菌的虾肉和贝类样品时,最低检出限也达到1×102CFU/m L。结果表明,本实验室建立的三重荧光PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强和重复性好的特点,是高通量检测致病性霍乱弧菌的有效手段。

• 单位
  中国农业科学院上海兽医研究所