环鸟苷酸腺苷酸促日本血吸虫感染小鼠肝虫卵肉芽肿形成及纤维化

作者：梁乐; 张璟; 沈玉娟; 胡媛; 曹建平^*

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(04): 441-453.

• 日本血吸虫
• 环鸟苷酸腺苷酸
• 干扰素基因刺激蛋白
• Ⅰ型干扰素

目的 研究第二信使分子环鸟苷酸腺苷酸(c GAMP)对日本血吸虫感染小鼠肝虫卵肉芽肿形成及纤维化的影响，并初步阐明其调控机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为cGAMP处理组(8只)、感染对照组(28只)、感染cGAMP处理组(28只)。cGAMP处理组尾静脉单独注射cGAMP (2μg, 100μl)，感染对照组和感染cGAMP处理组经腹部皮肤贴片感染日本血吸虫尾蚴[(20±2)条/鼠]后，分别经尾静脉注射PBS (100μl)和cGAMP (2μg, 100μl)，每周1次。3组小鼠各8只分别注射10次，每次注射后观察小鼠死亡情况。感染对照组和感染cGAMP处理组小鼠(各5只)于感染后7周，取小鼠眼眶血，ELISA检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平；取小鼠肝组织切片进行苏木精-伊红染色(HE)和Masson染色，计算单个虫卵肉芽肿面积和肝纤维化面积，并计数肝组织虫卵数。感染对照组和感染cGAMP处理组小鼠(各15只)于感染后0、 4和7周，取小鼠肝组织，提取总RNA，实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测肝组织β干扰素(IFN-β)编码基因Ifnb1的表达水平；取小鼠眼眶血，ELISA检测血清中IFN-β水平。采用GraphPad Prism 8.0.2软件进行统计学分析，两组间比较采用t检验。结果 cGAMP处理组小鼠无死亡；感染后10周，感染对照组小鼠死亡2只，感染c GAMP处理组小鼠死亡5只，两组差异有统计学意义(χ2=7.55, P <0.01)。感染对照组和感染cGAMP处理组小鼠血清ALT分别为(394.80±72.82)和(627.20±93.58) U/L (t=4.38, P <0.01)，血清AST分别为(605.00±148.90)和(871.80±138.10) U/L (t=2.94, P <0.05)。感染对照组和感染cGAMP处理组小鼠肝组织虫卵数分别为50 600±15 473和53 400±16 273，差异无统计学意义(t=0.28, P> 0.05); HE染色结果显示，感染对照组和感染c GAMP处理组均出现明显的肝组织结构被破坏，并有炎性细胞浸润，肝组织病理损害比例分别为(35.32±15.09)%和(64.98±13.91)%(t=3.23, P <0.05)；肝组织虫卵肉芽肿面积分别为(0.57±0.45)和(1.17±0.74) mm2(t=2.95, P <0.01); Masson染色结果显示，感染对照组和感染cGAMP处理组小鼠均发生肝纤维化，比例分别为(24.50±6.39)%与(39.02±6.79)%(t=3.48, P <0.01)。感染后4和7周，感染c GAMP处理组小鼠肝组织中Ifnb1 mRNA的相对表达量分别为16.58±6.71和10.52±2.88，较感染对照组的9.280±4.50和6.62±1.58均上调(t=2.95、 2.18, P <0.05)；感染cGAMP处理组小鼠血清IFN-β的含量分别为(1 206.45±211.87)和(960.62±151.33) pg/ml，较感染对照组的(845.12±284.11)和(685.20±143.88) pg/ml均上调(t=2.28、 2.95, P <0.05)。结论 cGAMP可促日本血吸虫感染小鼠肝虫卵肉芽肿形成及纤维化，通过诱导IFN-Ⅰ发挥免疫调控作用。

• 单位
  中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所; 上海健康医学院