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摘要
目的观察人趋化因子受体1(CMKLR1)基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)株中细胞的增殖情况并探讨其作用机制。方法以小鼠CMKLR1基因mRNA序列作为干扰靶点合成短发夹RNA并构建慢病毒载体,将慢病毒感染VSMC建立CMKLR1基因缺陷性细胞株。细胞株构建成功后,以正常VSMC和慢病毒感染VSMC为对照,分别采用荧光定量PCR和Western blot检测基因缺陷性细胞中CMKLR1的mRNA和蛋白水平。实验分为4组,在正常、慢病毒感染和基因缺陷性VSMC中加入廊小板源性生长因子-BB促进细胞增殖,分别为增殖组、对照组和沉默组,另取正常VSMC加入同等体积磷酸盐缓冲液(正常组)。采用细胞计数和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测各组细胞增殖情况,采用Western blot检测磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达水平。结果基因缺陷性VSMC中CMKLR1 mRNA的相对表达水平为0.23±0.04,明显低于正常(1.05±0.05)和慢病毒感染VSMC(0.99±0.04)(P均<0.01);基因缺陷性VSMC中CMKLR1蛋白的相对表达水平为0.29±0.04,明显低于正常(1.06±0.04)和慢病毒感染VSMC(0.95±0.02)(P<0.01)。增殖组的细胞数[(50.33±1.20)×103/cm2比(42.02±1.53)×103/cm2]和BrdU A450 nm值(1.80±0.05比1.55±0.04)均明显高于正常组(P均<0.05),CMKLR1沉默组的细胞数目[(23.33±2.03)×103/cm2]和BrdU A450 nm值(1.32±-0.02)均低于正常组(P均<0.05),而对照组与增殖组之间差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组VSMC的p-JNK表达水平比较,增殖组VSMC的p-JNK表达水平较高(1.36±0.02比1.03±0.03,P<0.05),而沉默组VSMC的p-JNK表达水平较低(0.79±0.05比1.03±0.03,P<0.05)。结论沉默CMKLR1基因表达可通过下调p-JNK表达抑制小鼠血管平滑肌细胞的增殖。
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