硫酸铍诱导人胚肺成纤维细胞凋亡机制研究

作者：严青; 周丽娜; 张娜; 周慈; 刘志宏

来源：中国职业医学, 2016, 43(04): 408-419.

DOI：10.11763/j.issn.2095-2619.2016.04.003

• 硫酸铍
• 人胚肺成纤维细胞
• 肌醇三磷酸
• 三磷酸肌醇受体Ⅲ型
• 2-氨基乙酯二苯基硼酸
• 细胞凋亡
• 钙离子

目的观察硫酸铍对人胚肺成纤维细胞(MRC-5细胞)凋亡的影响。方法取离体培养MRC-5细胞,随机分为对照组,硫酸铍低、中、高剂量染毒组,拮抗剂组和激活剂组。前4组硫酸铍染毒终浓度分别为0、1、10、100μmol/L;拮抗剂组先后分别予终浓度均为10μmol/L的硫酸铍和2-氨基乙酯二苯基硼酸联合处理;激活剂组先后分别予终浓度均为10μmol/L的硫酸铍和肌醇三磷酸(IP3)联合处理。各组染毒后分别于培养24和48 h时间点收获细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,激光共聚焦法检测细胞内钙离子(Ca2+)浓度,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测三磷酸肌醇受体Ⅲ型(IP3RⅢ)和B细胞淋巴瘤-2(BCL-2)的mRNA相对表达水平,酶联免疫吸附法测定IP3RⅢ和IP3蛋白表达水平。结果在24和48 h时间点的细胞凋亡率,硫酸铍3个剂量组均低于同时间点对照组(P<0.05),拮抗剂组分别低于同时间点对照组和硫酸铍中剂量组(P<0.05);激活剂组48 h时间点细胞凋亡率低于同时间点的对照组(P<0.05),高于同时间点硫酸铍中剂量组(P<0.05)。24 h时间点细胞内Ca2+浓度,在硫酸铍低剂量组低于对照组(P<0.05),硫酸铍高剂量组高于对照组(P<0.05);48 h时间点硫酸铍中和高剂量组细胞内Ca2+浓度均低于对照组(P<0.05);分别与24、48 h时间点对照组和硫酸铍中剂量组比较,拮抗剂组细胞内Ca2+浓度均下降(P<0.05),激活剂组细胞Ca2+浓度均升高(P<0.05)。24和48 h时间点BCL-2 mRNA表达水平在硫酸铍3个剂量组、拮抗剂和激活剂组均高于同时间点对照组(P<0.05)。细胞IP3RⅢmRNA表达水平在硫酸铍3个剂量组、拮抗剂和激活剂组均高于对照组(P<0.05)。24 h时间点IP3RⅢ蛋白表达水平在硫酸铍中剂量组、拮抗剂组和激活剂组均低于对照组(P<0.05);48 h时间点IP3RⅢ蛋白表达水平,在硫酸铍高剂量组低于对照组(P<0.05),拮抗剂和激活剂组均高于硫酸铍中剂量组(P<0.05)。细胞IP3蛋白表达水平在硫酸铍低、中剂量组以及激活剂组均高于对照组(P<0.05),激活剂组高于硫酸铍中剂量组(P<0.05)。结论硫酸铍可能通过调节IP3R/Ca2+通路,改变细胞内Ca2+浓度,抑制MRC-5细胞凋亡;IP3可以改善硫酸铍引起的MRC-5细胞内Ca2+下降。

• 单位
  基础医学院; 公共卫生学院; 宁夏医科大学; 宁夏疾病预防控制中心