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摘要
目的:探讨黄精丸对D-半乳糖和冈田酸所致学习记忆障碍造模的阿尔茨海默病(AD)小鼠大脑海马神经元糖原合成酶激酶3β(GSK-3β),蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性的影响及其抑制tau蛋白过磷酸化机制。方法:采用小鼠颈背部皮下注射1.0%D-半乳糖液(0.14 g·kg-1·d-1,连续4周)后,再右侧脑室一次性注射(75 ng)冈田酸2μL,制作小鼠AD模型,经Morris水迷宫检测挑选造模成功的AD小鼠,再随机分为AD模型组,美金刚组(1.3×10-3g·kg-1·d-1),黄精丸组(2.5 g·kg-1·d-1),另设假手术组和正常组;同时点给假手术组的小鼠右侧脑室一次性注射生理盐水2μL处置作造模对照。造模2周后给两实验药物组小鼠灌胃相应剂量实验药物,持续4周。另外,AD造模2周后,同时给假手术组及AD模型组小鼠每天灌胃等量生理盐水,持续4周;正常组小鼠仅日常饲养。灌胃结束后,采用旷场实验及跳台实验评价各小鼠的探索活动能力、焦虑水平及学习记忆能力差异;尼氏染色检测各组小鼠海马CA1,CA3区神经元数量差异;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组小鼠海马GSK-3β,PP2A mRNA表达变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠海马GSK-3β,PP2A,磷酸化tau(p-tau)与总tau(t-tau)蛋白的表达变化。结果:与正常组比较,AD模型组小鼠自发活动能力与探索行为能力低、焦虑水平高,表现出较明显的痴呆状态,少动且易呆卧躲藏,学习反应时间要长,学习记忆错误次数明显增多,海马CA1与CA3区神经元数量均减少,PP2A mRNA及蛋白表达显著下降,GSK-3βmRNA及其蛋白表达,p-tau蛋白水平及p-tau/t-au值均显著升高(P<0.01),t-tau蛋白表达水平有所降低但差异无统计学意义。与AD模型组比较,黄精丸组小鼠自发活动能力与探索行为能力强、焦虑水平低、学习与记忆成绩明显提高,海马CA1与CA3区神经元数量增多,PP2A mRNA及蛋白表达显著升高,GSK-3βmRNA及蛋白表达,p-tau蛋白水平及p-tau/t-tau值均显著降低(P<0.01),但t-tau蛋白表达水平差异无统计学意义。结论:黄精丸可抑制AD小鼠海马神经元tau蛋白过磷酸化,恢复tau蛋白功能,保护海马神经,进而发挥抗AD作用,其机制可能与调控海马神经元GSK-3β与PP2A活性平衡有关。
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