科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的：研究E1B-55kDa基因缺陷型溶瘤腺病毒H101对结肠癌HCT-116细胞及其裸鼠皮下移植瘤生长的影响，并探讨可能的作用机制。方法：使用不同效价的缺陷型溶瘤腺病毒H101作用于结肠癌HCT-116、SW480和RKO细胞24、48和72 h后，采用CCK-8法检测细胞的存活率。随后，用效价为1.0×107 vp/mL的缺陷型溶瘤腺病毒H101处理HCT-116细胞72 h后，在光学显微镜下观察细胞形态学变化，同时采用蛋白质印迹法检测HCT-116细胞中腺病毒衣壳蛋白Hexon的表达情况，以及FCM法检测对细胞周期的影响。采用不同效价(1.0×106和2.5×106 vp/mL)的缺陷型溶瘤腺病毒H101处理HCT-116细胞48 h后，通过细胞集落形成实验检测缺陷型溶瘤腺病毒H101对HCT-116细胞集落形成能力的影响，以及Transwell小室实验检测对HCT-116细胞的迁移和侵袭能力的影响。用HCT-116细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型，瘤内注射缺陷型溶瘤腺病毒H101，观察腺病毒对裸鼠移植瘤生长的影响，并采用免疫组织化学法检测Ki-67和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在移植瘤中的表达情况。结果：与对照组相比，缺陷型溶瘤腺病毒H101明显抑制HCT-116细胞的生长活力(P<0.05)，且这种抑制作用呈一定的浓度和时间依赖性；而SW480和RKO细胞，仅在缺陷型溶瘤腺病毒H101效价高(1.0×107 vp/mL)和作用时间长(72 h)时，对细胞的增殖具有抑制作用(P均<0.05)。缺陷型溶瘤腺病毒H101(1.0×107 vp/mL)处理HCT-116细胞72 h后，HCT-116细胞失去正常形态，悬浮细胞数目增多，并出现细胞破裂导致膜内容物流出；HCT-116细胞的集落形成能力明显降低(P<0.001)；缺陷型溶瘤腺病毒H101感染后可上调HCT-116细胞中腺病毒衣壳蛋白Hexon的表达水平(P<0.001)，证明缺陷型溶瘤腺病毒H101可在HCT-116细胞中有效表达。缺陷型溶瘤腺病毒H101抑制HCT-116细胞的迁移和侵袭(P均<0.01)，并将HCT-116细胞阻滞在S期(P<0.01)。缺陷型溶瘤腺病毒H101能明显抑制裸鼠皮下移植瘤的生长，移植瘤的体积和质量明显减小(P均<0.001)，抑瘤率为92.28%。HE染色结果显示，与对照组相比，缺陷型溶瘤腺病毒H101治疗组移植瘤组织中细胞坏死范围更大。免疫组织化学法检测结果提示，缺陷型溶瘤腺病毒H101治疗组移植瘤中表达Ki-67和VEGF的细胞数均明显减少(P均<0.001)，表明缺陷型溶瘤腺病毒H101具有显著的抑制肿瘤细胞增殖和抗肿瘤血管生成的作用。结论：E1B-55kDa缺陷型溶瘤腺病毒H101对结肠癌HCT-116细胞具有显著的体外和体内抗肿瘤作用，是一个潜在的抗肿瘤药物。
-
单位上海交通大学医学院附属新华医院
