科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
【目的】辣椒脉黄病毒（Pepper vein yellows virus, PeVYV）属马铃薯卷叶病毒属（Polerovirus），生产上主要侵染辣椒，目前在我国呈现快速扩展态势，因此，亟需开展PeVYV致病性研究，为分析对辣椒的潜在威胁提供依据。以PeVYV编码运动蛋白P4为免疫源，制备多克隆抗体，建立PeVYV P4蛋白特异性检测方法，为PeVYV P4蛋白功能研究奠定基础。【方法】采用RT-PCR技术，从感染PeVYV辣椒cDNA中扩增获得片段大小为471bp的PeVYV P4基因，并克隆到原核表达载体pDEST17，转化E. coli Rosetta中进行诱导表达，采用Ni-NTA柱层析纯化。以纯化P4蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。制备的多克隆抗体采用Western blotting检测。【结果】原核表达的PeVYV P4蛋白，SDS-PAGE表明纯化蛋白为一分子量约为25 kDa的单一条带。Western blotting检测表明，制备的多克隆抗体，特异性的结合P4蛋白。PeVYV侵染辣椒样本检测表明，制备的P4多克隆抗体能特异性检测PeVYV。【结论】制备的PeVYV P4多克隆抗体，可用于特异性检测PeVYV P4蛋白，为进一步深入研究P4蛋白的功能奠定基础。
- 单位
