从江香猪lncGHR1基因的克隆、组织表达及超表达研究

作者：崔小芝; 吴巧群; 吴小敏; 朱晓锋; 谌颖莲; 谢玲玲; 赵佳福; 陈伟; 许厚强^*

来源：农业生物技术学报, 2020, 28(12): 2165-2175.

• 从江香猪
• 生长激素受体(GHR)
• 长链非编码RNAs (lncRNAs)
• 差异表达

生长激素受体(growth hormone receptor, GHR)在动物生长发育过程中具有重要作用。为研究GHR基因相关长链非编码RNAs (long noncoding RNAs, lncRNAs)在从江香猪(Sus scrofa)不同组织中的表达规律,本研究以贵州从江香猪和大白猪为研究对象,以生长发育相关的miR-146b-3p为关联点,通过SWChen 2.3程序筛选GHR相关lncRNAs,对筛选出来的lncRNAs进行克隆验证。以候选lncRNA NONSUST017828.1 (GenBank No. TCONS00020564,命名为lncGHR1)为研究对象,对其进行生物信息学及组织表达谱分析,并构建lncGHR1-CMV超表达载体,转染至人源胚胎肾细胞(human embryonic kidney cells, HEK-293T)和从江香猪原代肌细胞,检测细胞增殖相关基因YAP (Yes-associated protein)和TAZ(transcription activator)的表达情况。结果显示,lncGHR1二级结构最小自由能为-131.20 kcal/mol,含3个ORF;局部比对结果发现,lncGHR1与猪GHR 3’UTR相似程度最高;lncGHR1与miRNA结合的抑制系数为4.96%,其中miR-146-3p与lncGHR1亲和评分最高。lncGHR1在从江香猪脾脏和肺脏中表达量最高,心脏中最低;在大白猪肝脏中表达量最高,心脏中最低;lncGHR1在从江香猪脾脏、肺脏、背最长肌和小肠中的表达量均极显著高于大白猪(P<0.01),但肝脏中的表达量极显著低于大白猪(P<0.01),其他组织表达差异不显著。lncGHR1在HEK-293T细胞和从江香猪原代肌细胞中的超表达,显著提高TAZ基因的表达(P<0.05),但对YAP影响不大(P>0.05)。以上结果表明lncGHR1在生长发育过程中发挥了重要作用,对解析从江香猪生长缓慢、个体矮小的成因机制及猪的遗传改良育种具有重要意义。

• 单位
  贵州大学; 动物科学学院