结核分枝杆菌Ag85B/GST融合蛋白表达载体构建及在大肠杆菌中的表达

作者：杨登科; 靳风烁; 张勇; 江军; 闫天中

来源：免疫学杂志, 2004, (04): 313-316.

• 结核杆菌
• Ag85B
• 质粒
• 原核表达

目的　构建结核分枝杆菌Ag85B/GST融合蛋白表达质粒 ,并在大肠杆菌 (E .coli)中诱导表达。方法　以质粒pUC18/Ag85B为模板 ,用PCR法扩增结核杆菌Ag85B基因 ,扩增的Ag85B上游含有EcoRⅠ酶切位点 ,下游含有SalⅠ酶切位点 ;将Ag85B基因定向插入质粒pGEX 4T 1中 ,构建原核表达质粒pGEX Ag85B并转化E .coliBL2 1,筛选阳性重组子 ,限制性内切酶切鉴定和DNA序列测定 ,异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot鉴定结果。结果　成功构建原核表达质粒pGEX Ag85B并表达出Mr 约 5 6 0 0 0大小的Ag85B/GST融合蛋白 ,表达量占总菌体的 30 %。结论　为进一步进行纯化Ag85B蛋白和研究其在膀胱肿瘤治疗中的作用奠定了基础

• 单位
  第三军医大学大坪医院