不同冻融条件下血小板裂解液的制备

作者：刘广亚; 许育兵; 张喻; 朱展鸿; 单桂秋^*

来源：中国输血杂志, 2019, 32(06): 545-548.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2019.06.009

• 温度
• 血小板裂解液
• 生长因子
• 软骨细胞
• 细胞增殖

目的探讨在不同冻融条件下血小板裂解液(PL)制备的最适条件。方法由南部战区血液中心提供50人份PRP(30mL/人份),每份PRP再随机分为3等分,分别为A、B、C 3组。将A、B两组PRP分别至于-20℃(A组)、-80℃(B组)冰箱保存24 h后,反复冻存融化6次,获取血小板能裂解液;C组添加牛凝血酶和钙离子,激活剂与PRP按照1∶9的比例添加获取PRP上清液。应用酶联免疫吸附试验法定量检测A、B、C 3组中血小板源性生长因子(PDGF-AA)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF)的浓度;细胞增殖实验采用CCK-8试剂检测在A、B、C 3个实验组制备的上清液与对照组在24 h、48 h、72 h对小鼠软骨细胞增殖的影响。结果生长因子含量检测:A、B、C3组中PDGF-AA的含量分别为234.75±12.73、236.58±32.64、244.25±23.29(P>0.05);TGF-β的含量分别为589.66±53.54、575.42±70.96、518.08±111.7(P>0.05);IGF的含量分别为15.77±1.65、16.42±0.88、14.24±1.67(P>0.05);3组间3种生长因子含量均无统计学差异。小鼠软骨细胞增殖实验(OD值):实验A、B、C 3组与对照组在小鼠软骨细胞培养24h时,分别为:0.06±0.02、0.05±0.02、0.05±0.01、0.01±0.01;48 h时分别为0.22±0.13、0.11±0.03、0.24±0.12、0.04±0.02;72h时分别为0.32±0.08、0.28±0.12、0.27±0.11、0.08±0.03;其中实验组3组在24、48、72 h时均优于对照组(P<0.05),A、B、C3组组内比较,24、48、72h时差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 -20℃冻融温度制备的PL在某些治疗上可以代替牛凝血酶激活上清液应用于临床,而且更加安全。