MINDY2过表达慢病毒质粒的构建及其对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响

作者：张路瑶; 李泽艳; 王晓旋; 石兴云; 罗婉媜; 宋良鹏; 孙玉玲; 李得意; 马雪艳^*

来源：现代肿瘤医学, 2023, 31(07): 1187-1194.

• MINDY2
• A549细胞
• 增殖
• 凋亡
• 细胞周期
• 迁移

目的:构建能表达MINDY2的慢病毒质粒，并获取稳定过表达MINDY2的A549细胞株，探讨过表达MINDY2对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:采用同源重组法构建pLVX-Flag-MINDY2过表达质粒，并通过菌落PCR和测序对重组质粒进行鉴定；在HEK293T细胞中瞬时转染pLVX-Flag-MINDY2质粒，通过Western blot实验检测Flag-MINDY2融合蛋白的表达；重组慢病毒载体包装HEK293T细胞，获取病毒上清液感染A549细胞，嘌呤霉素筛选后利用Western blot实验检测Flag-MINDY2融合蛋白的表达；CCK8实验、Transwell和划痕实验检测过表达MINDY2对A549细胞增殖和迁移能力的影响；流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化。结果:测序结果证明成功构建了MINDY2过表达慢病毒载体；在HEK293T细胞中瞬时转染MINDY2重组质粒，能检测到Flag-MINDY2融合蛋白的表达；Western blot结果显示MINDY2在A549细胞中稳定过表达；CCK8实验表明过表达MINDY2能够抑制A549细胞的增殖；流式细胞术表明过表达MINDY2的A549细胞凋亡率显著升高，细胞周期被阻滞在G0/G1期；Transwell和划痕实验表明过表达MINDY2能够抑制A549细胞的迁移。结论:成功构建能高效表达MINDY2的慢病毒质粒和稳定表达MINDY2的A549细胞株；并且MINDY2能够抑制肺癌细胞系A549的增殖和迁移，促进细胞的凋亡。

• 单位
  基础医学院; 大理大学