人腺病毒7型DNA结合蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作者：朱云; **琳; 段亚丽; 谢正德^*

来源：中华预防医学杂志, 2022, 56(02): 171-177.

• 人腺病毒7型
• DNA结合蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

目的原核表达人腺病毒(HAdV)7型DNA结合蛋白(DBP), 制备DBP蛋白多克隆抗体。方法合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体, 转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞, IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体, 使用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定该抗体效价;使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法(IFA)检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。结果成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体, 表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%, 间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1 024 000, Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性, 间接ELISA方法检测HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%(19/38)和63.2%(24/38)。结论成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体, 获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。

• 单位
  中国医学科学院; 首都医科大学附属北京儿童医院