羊耳菊活性部位对PXR高表达HepG2细胞中CYP3A4蛋白表达的影响

作者：杨畅; 宋菲; 何俊奇; 王永林; 李勇军; 兰燕宇; 陈一飞^*; 刘亭^*

来源：贵州医科大学学报, 2020, 45(10): 1137-1142.

DOI：10.19367/j.cnki.2096-8388.2020.10.004

• 催化域
• 羊耳菊
• 活性部位
• 瞬时转染
• 细胞色素CYP3A4
• 孕烷X受体

目的:探讨羊耳菊活性部位(IC-MAC)对孕烷X受体(PXR)高表达Hep G2细胞中细胞色素P4503A4酶(CYP3A4)蛋白表达的影响。方法:将质粒pc DNA3.1-PXR转化至DH5α感受态大肠杆菌中扩增并提取质粒,采用Fu GENE6转染试剂,将pc DNA3.1-PXR质粒转染至人肝癌Hep G2细胞,以重组PXR为对照,采用Western blot技术测定PXR-HepG2和Hep G2细胞中PXR的表达,并筛选得到高表达PXR的PXR-HepG2细胞模型;将PXR-HepG2细胞和Hep G2细胞分别分为阴性对照组(DMSO组,0.1%)、药物处理组(25、50、100 mg/L IC-MAC)和阳性药物组[PXR激动剂利福平(RIF)组,10μmol/L],分别处理24、48及72 h后,采用Western blot技术测定细胞中CYP3A4蛋白的表达。结果:Western blot结果显示,与Hep G2细胞相比,转染pc DNA3.1-PXR质粒的PXR-HepG2细胞中PXR表达明显上调(P <0.01),证明PXR-HepG2细胞模型构建成功; 25、50及100 mg/L IC-MAC分别作用于PXR-HepG2和Hep G2细胞24、48和72 h后,与DMSO组相比,25、50及100 mg/L IC-MAC均可上调PXR-HepG2和Hep G2细胞中CYP3A4表达(P <0.05),且PXR-HepG2细胞上调幅度较Hep G2细胞更大。结论:PXR高表达的PXR-HepG2细胞中IC-MAC上调CYP3A4蛋白表达的幅度大于Hep G2细胞,提示IC-MAC可能通过PXR来调控CYP3A4蛋白的表达。

• 单位
  贵州医科大学