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摘要
目的 探讨微小RNA-145 (miR-145)在原代培养海马神经元癫痫模型中的作用及其分子机制。方法 培养原代海马神经元细胞,构建无镁生理外液诱导的原代培养海马神经元癫痫模型。将细胞分为对照组、模型组、模拟物对照组(NC mimic组)、miR-145模拟物组(miR-145 mimic组)、miR-145模拟物+空载质粒组(miR-145 mimic+Vector组)、miR-145模拟物+WNT2B过表达质粒组(miR-145mimic+pcDNA-WNT2B组)。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)实验检测各组神经元细胞中miR-145的表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;ELISA试剂盒检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量;Western blotting检测各组细胞中Bcl-2、Cleaved-caspase 3、β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达。生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-145和WNT2B的靶向关系。结果 与对照组比较,模型组神经元细胞中miR-145表达显著降低,MDA水平显著升高,GSH和SOD水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低,Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05)。与NC mimic组比较,miR-145 mimic组神经元细胞中miR-145表达显著升高,MDA水平显著降低,GSH和SOD水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高,Cleaved caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05)。miR-145与WNT2B 3’-UTR靶向结合。与miR-145 mimic+Vector组比较,miR-145 mimic+pcDNA-WNT2B组神经元细胞中WNT2B蛋白表达显著升高,MDA水平显著升高,GSH和SOD水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低,Cleaved caspase-3、β-catenin和Cyclin D1蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论 miR-145通过靶向WNT2B调控Wnt/β-catenin通路抑制癫痫模型海马神经元氧化应激和凋亡。
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