大型艾美耳球虫重组蛋白GAPDH对兔的免疫保护效果评价

作者：郑若愚; 肖洁; 白鑫; 陈浩; 蒲家艳; 任永军^*; 杨光友^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(10): 4338-4349.

• 兔
• 大型艾美耳球虫
• 三磷酸甘油醛脱氢酶
• 重组蛋白
• 免疫保护

本研究旨在评价大型艾美耳球虫重组蛋白(rEm-GAPDH)对兔的免疫保护效果，为大型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。根据转录组数据筛选出Em-GAPDH基因，进行原核表达与蛋白纯化；将50只45日龄无球虫感染幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEm-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白和1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1mL 100μg rEm-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫，二免14 d后每只兔经口感染1×105个大型艾美耳球虫孢子化卵囊，观察各组兔临床症状，每周固定时间采血和称重，感染14 d后宰杀剖检并测定和统计各组兔的卵囊排出量、相对增重、特异性IgG抗体和细胞因子等。结果成功表达了重组蛋白rEm-GAPDH,大小在59 ku左右，且大部分表达在包涵体。免疫保护试验表明：感染后不免疫攻虫组出现症状，而免疫组症状不明显。rEm-GAPDH免疫组的卵囊减少率达57.16%,相对增重率显著大于不免疫攻虫组(P<0.05),ACI值为144.96。特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与对照组存在显著差异(P<0.05)。大型艾美耳球虫重组蛋白rEm-GAPDH可以减少增重损失和卵囊排出，能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答，具有一定免疫保护作用，可以作为大型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。

• 单位
  四川省畜牧科学研究院; 四川农业大学