维持静息细胞周期状态的小鼠肝细胞的分离纯化和原代培养

作者：罗娜; 蔡园; 张俊; 汤为学; 吴小翎; 何松

来源：中国生物制品学杂志, 2012, (11): 1530-1534.

DOI：10.13200/j.cjb.2012.11.131.luon.034

• 肝细胞
• 分离
• 提纯
• 原代培养
• 细胞周期 Hepatocytes
• Isolation
• Purification
• Primary culture
• Cell cycle

目的建立维持正常肝细胞静息细胞周期状态的小鼠肝细胞的分离纯化及原代培养方法。方法对传统小鼠肝细胞分离纯化的原位两步胶原酶灌流法进行改良,台盼蓝染色法计数细胞总数并鉴定肝细胞活率;用改良的WME培养基对C57BL/6小鼠肝细胞进行原代培养,经过碘酸雪夫氏染色(Periodic acid-Schiff stain,PAS)和全自动生化分析仪鉴定肝细胞的生物学特性及功能;Western blot法检测分离纯化后的小鼠肝细胞及原代培养24、48、72、96 h小鼠肝细胞的细胞周期蛋白p16、cyclin D1和cyclin A的表达水平。结果分离纯化后可从每只小鼠肝脏稳定获取(3～5)×107个肝细胞...

• 单位
  重庆医科大学; 重庆医科大学附属第一医院