一种绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞源性外泌体的构建及鉴定

作者：任瑞; 谭晓红; 鲁亚成; 刘辉; 张显芳; 付媛; 黄奎; 黄奕弟; 马志健; 易西南

来源：神经解剖学杂志, 2017, 33(02): 167-171.

DOI：10.16557/j.cnki.1000-7547.2017.02.0010

• 外泌体
• 骨髓间充质干细胞
• 绿色荧光蛋白

目的:构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs),获得GFP标记的MSCs源性的外泌体(exosomes)。方法:全基因合成CD63序列,连接到穿梭载体,酶切验证后转染293T细胞,测定病毒滴度后感染MSCs,72 h后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞。荧光定量PCR检测CD63在MSCs中的表达。取其无血清培养72 h的上清液,获得提取物,经透射电镜和Western Blot验证。结果:提取物为类圆形囊泡,大小约为40100 nm,具有CD63和Alix表达。结论:成功构建携带GFP标记的MSCs源性的外泌体,为研究外泌体在细胞中的摄取及信号传递提供了工具。

• 单位
  海南医学院; 解剖学教研室; 第四军医大学