玄参ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作者：赵志新; 梁宗锁; 姜在民; 薛媛菲; 杨永宙

来源：药物生物技术, 2007, (05): 318-323.

DOI：10.19526/j.cnki.1005-8915.2007.05.002

• 玄参
• ISSR-PCR反应体系
• PCR扩增程序
• 优化 Scrophularian ningpoensis Hemsl
• ISSR-PCR reaction system
• PCR amplification procedure
• Optimizing

为了建立稳定的玄参ISSR-PCR反应体系,本试验采用5因素(dNTPs、Taq DNA聚合酶、MgCl2、引物及模板)5水平正交设计筛选PCR体系,并利用单因子梯度进一步优化反应体系各因素浓度和扩增程序(退火温度、延伸时间和循环次数)。结果表明:在20μl反应体系中含10×buffer,0.3 mmol/L dNTPs,0.5~1.0 UTaq DNA聚合酶,2.0 mmol/L MgCl2,0.2μmol/L引物,150 ng模板,扩增效果最好。PCR扩增程序:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,50~61℃退火(退火温度随引物不同而变化)45 s,72℃延伸1 min,35个循环...

• 单位
  生命科学学院; 西北农林科技大学