菠菜叶绿体基因组定点整合表达载体构建及原核表达

作者：耿晓霞; 王文超; 侯丙凯

来源：山东大学学报(理学版), 2010, (01): 46-54.

• 菠菜
• 叶绿体转化
• 载体构建
• 定点整合
• GFP基因 spinach(Spinacia oleracea L.)
• chloroplast transformation
• vector construction
• site-specific integration
• GFP gene

分析菠菜叶绿体基因组全序列,选用了rbcL基因和accD基因的间隔区作为外源基因的定点整合位点,并从菠菜叶绿体基因组中克隆了rbcL基因全长和accD基因的5′端部分,长度分别为1956 bp和1320 bp。以这2个DNA片段作为同源重组片段,以烟草叶绿体基因的启动子Prrn和终止子psbA3′控制外源基因的转录,构建了包含筛选标记基因aadA基因(编码氨基糖苷-3′-腺苷酸转移酶,具有壮观霉素和链霉素抗性)和报告基因GFP(编码绿色荧光蛋白)的菠菜叶绿体基因组定点整合表达载体pRAGA。酶切结果显示构建正确。将该载体转化大肠杆菌,在激光扫描共聚焦显微镜下用488 nm蓝光激发,发现大肠杆菌...

• 单位
  山东大学