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摘要
为了探究不同浓度IAA和GA对MiNOL启动子的影响及确定其主要活性部位，采用同源克隆的方法，以‘金煌’芒果叶片为材料，克隆得到2 057 bp的MiNOL启动子序列，根据PlantCARE网站预测的顺式作用元件的位置及分布，扩增出4个不同区段的MiNOL启动子：MiNOL-1 (2 057 bp)、MiNOL-2 (1 493 bp)、MiNOL-3 (960 bp)和MiNOL-4 (428 bp)，构建含双荧光素酶报告基因的植物表达载体，对转化后的烟草，用不同浓度IAA和GA进行处理并检测活性。序列分析结果显示，该启动子含有TATA-box、CAAT-box等核心元件，CGTCA-motif、GARE-motif、TGA-element等激素调控元件，GT1-motif、ARE、LTR等环境相关响应元件，HD-Zip 3蛋白结合位点及一些未知功能元件，表明在芒果果实发育过程中该基因的表达可能会受到激素、光照、温度等因子的诱导。活性检测结果表明，当激素处理浓度为0时，活性随着启动子长度的增加而先上升后下降，MiNOL-3活性最高，为0.130，与其余区段差异显著，推测该启动子的活性最强区段可能位于中下游；随着IAA浓度升高，MiNOL-2的活性呈下降趋势，表明生长素调控元件可能为负调控；随着GA浓度升高，MiNOL-1的活性呈上升趋势，当浓度为10 mg/L时，其活性最强，为0.115，与其他区段活性差异显著，表明赤霉素响应元件可能为正调控。本研究结果为进一步深入研究芒果MiNOL基因的分子机制及其启动子转录作用机理提供一定的理论基础。
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