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摘要
背景:表皮生长因子作为一种辅助生长因子,但是对于骨髓间充质干细胞的生长是否必须尚无定论。目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞分离提取以及鉴定的方法,同时探索表皮生长因子对其增殖能力以及迁移能力的影响,同时探索其潜在机制。方法:①采用全骨髓贴壁法,分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,培养至第3代,使用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD29,CD45,CD90表达情况。通过成骨和成脂分化诱导,更进一步鉴定骨髓间充质干细胞;②同时通过CCK-8法和克隆形成实验测量表皮生长因子对骨髓间充质干细胞的第3代细胞的增殖能力的影响。同时通过Transwell小室验证表皮生长因子对骨髓间充质干细胞的第3代细胞迁移能力的影响。通过蛋白印迹实验检测PI3K/Akt和核因子κB信号通路相关蛋白表达水平,探索表皮生长因子的作用机制。结果与结论:①原代骨髓间充质干细胞呈多角形和梭形,随着培养时间增加,逐渐呈梭形为主。流式细胞术检测第3代细胞表面CD29,CD90表达呈阳性,CD45表达成阴性。并且对骨髓间充质干细胞的第3代细胞成功进行了成骨和成脂分化诱导;②表皮生长因子能够促进第3代细胞的增殖,且细胞中PI3K/Akt信号通路关键分子p-Akt表达水平的增加,同时其下游信号分子Bax表达水平降低而Bcl-2表达升高。表皮生长因子能够通过调节核因子κB信号通路分子p 65以及IκB的磷酸化水平,同时也增加了基质金属蛋白酶9的表达水平,从而促进大鼠骨髓间充质干细胞的迁移;③结果表明表皮生长因子促进骨髓间充质干细胞的增殖和迁移。
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单位遵义医科大学; 遵义医学院附属医院
