小鼠肝脏自然杀伤细胞分离纯化及受体表达分析

作者：邹勇; 陈韬; 严伟明; 王洪武; 宋戈; 肖非; 罗小平; 宁琴

来源：中西医结合肝病杂志, 2008, (05): 277-279.

• 自然杀伤细胞
• 受体
• 密度梯度离心
• 免疫磁珠分选

目的:建立一种有效分离纯化小鼠肝脏自然杀伤细胞(NK细胞)的方法,并对其表面几种NK细胞受体(NKP46、NKG2D、NKG2A/C/E和Ly49A/C/I)的表达进行分析。方法:首先利用Percoll不连续密度梯度离心分离小鼠肝脏淋巴细胞,进一步经CD5(Ly-1)磁珠阳性分选清除CD3+DX5+T细胞,最后利用CD49b(DX5)磁珠阳性分选肝脏NK(CD3-DX5+)细胞。分离后的细胞经台盼蓝染色检测细胞存活率,流式细胞术检测肝脏NK细胞纯度及几种NK细胞受体的表达百分率。结果:不连续密度梯度离心能有效分离出肝脏淋巴细胞,CD5(Ly-1)磁珠清除CD3+DX5+T细胞后再用CD49b(DX5)磁珠阳性分选出肝脏NK(CD3-DX5+)细胞,纯度可达到(94.8±1.0)%,存活率为92%~95%。NK细胞受体NKP46、NKG2D、NKG2A/C/E和Ly49A/C/I在小鼠肝脏NK细胞上的表达百分率分别为(97.9±0.7)%、(93.2±1.7)%、(57.2±0.9)%和(63.3±1.9)%。结论:成功建立了一种有效分离纯化小鼠肝脏NK细胞的方法,掌握了正常小鼠肝脏NK细胞上几种重要受体的表达情况,为进一步在病毒性肝炎小鼠模型中进行肝脏NK细胞功能学研究及受体基因芯片分析奠定了基础。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院