miR-210靶向CDK7参与骨关节炎保护的作用机制

作者：徐志强; 李晗^*

来源：山西医科大学学报, 2021, 52(09): 1195-1201.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2021.09.017

• 骨关节炎
• 微小RNA-210
• 细胞周期蛋白依赖性激酶7
• 软骨细胞
• 核因子-κB通路

目的探讨骨关节炎(OA)发生过程中微小RNA-210(microRNA,miR-210)及细胞周期蛋白依赖性激酶7(CDK7)的调控作用。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、AgomiR-210组(注射miR-210激动剂,2 nmol/只)、AgomiR-210 NC组(注射miR-210阴性对照试剂,2 nmol/只),每组10只。采用膝关节内侧韧带离断与半月板切除术建立OA模型,术后1周经关节腔注射相应药物8周。观察大鼠软骨大体形态;苏木精-伊红染色(HE)观察软骨组织学形态并进行Mankin’s评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)测软骨组织中CDK7、核因子-κB活性因子p65(NF-κB p65)及磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测软骨组织中miR-210表达。双荧光素酶报告试验验证miR-21与CDK7的靶向关系。取人SW1353软骨细胞系,设置为:正常组、OA模型组(10 ng/ml IL-1β诱导建立OA模型)、miR-210 mimic组(转染miR-210过表达试剂)、miR-210 mimic NC组(转染miR-210过表达阴性对照试剂)、miR-210 mimic+pcDNA-CDK7(转染miR-210过表达试剂及CDK7过表达序列)、miR-210 mimic+pcDNA组(转染miR-210过表达试剂+CDK7过表达阴性对照序列);RT-qPCR及Western blot检测miR-210及CDK7、p-NF-κB p65/NF-κB p65、IL-6、TNF-α蛋白表达。结果与正常对照组相比,模型组及AgomiR-210 NC组大鼠关节面糜烂、软骨缺损等病理损伤严重;AgomiR-210组大鼠关节及软骨病变缓解。与正常对照组相比,模型组及AgomiR-210 NC组大鼠Mankin’s评分、CDK7、p-NF-κB p65/NF-κB p65、IL-6、TNF-α蛋白表达升高(P<0.05),miR-210表达降低(P<0.05)。AgomiR-210组大鼠上述指标变化趋势与模型组及AgomiR-210 NC组相反(P<0.05)。双荧光素酶报告试验结果显示,与miR-210 NC+CDK7-3′UTR-WT组比较,miR-210 mimics+CDK7-3′UTR-WT组荧光素酶活性降低(P<0.05)。miR-210 mimic与pcDNA-CDK7共转染,可削弱miR-210 mimic下调CDK7-NF-κB p65通路表达及缓解软骨细胞炎性反应的作用(P<0.05)。结论 miR-210可能通过靶向抑制CDK7表达,抑制NF-κB通路活化,进而缓解OA炎症损伤及软骨病变。

• 单位
  冀中能源峰峰集团有限公司总医院; 河北医科大学第三医院