高效液相色谱检测血液CD38酶活性方法的建立

作者：赵香慧; 步霄霄; 朱涵誉; 李红霞; 史济华; 王思明; 牟洪娜; 李姿芸; 吴铸; 董军; 陈文祥; 杨睿悦^*

来源：中华检验医学杂志, 2023, 46(10).

• 色谱法, 高压液相
• CD38
• 衰老
• 结直肠癌
• NAD+

目的建立高效液相色谱(HPLC)测定血液烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)主要消耗酶CD38酶活性的方法, 检测CD38酶活性在不同年龄和健康状态人群中的差异。方法选择50 μl全血作为检测样本、150 μl 浓度为500 μmol/L 的β-NAD为酶反应底物, 全血预孵育消耗掉内源性β-NAD后, 加入底物, 在37 ℃温育40 min, 高氯酸(PCA)终止反应, HPLC测定酶促反应前后产物烟酰胺(NAM)变化量并计算CD38酶活性。评价方法的线性、检测限、定量限、精密度、回收率和稳定性等。用所建方法检测60名健康体检者和30名结直肠癌患者血液CD38活性。结果 37 ℃预孵育20 min可消除内源性β-NAD的影响。NAM在浓度为0.1～3.2 μmol/L的范围内线性良好, r=0.999, 检测限为0.5 nmol/L, 定量限为2.1 nmol/L。平均批内精密度(CV)和总CV分别为3.22%～4.03%、2.91%～4.70%。加样回收率在94.82%～96.81%。全血在4 ℃放置48 h、室温放置8 h、冻存全血融化后室温放置2 h以及反复冻融3次均不影响CD38酶活性。NAM、β-NAD标准品和前处理后的样本在4 ℃放置48 h、室温放置8 h均可保持稳定。CD38活性随加入的CD38抑制剂4-氨基喹啉衍生物78c的浓度升高而逐渐降低。60例健康体检者结果显示, 老年组CD38酶活性高于青年组(t=-2.776, P=0.007), 30例结直肠癌患者CD38酶活性高于健康体检者(t=-2.572, P=0.012)。结论本研究建立的HPLC测定CD38酶活性的方法简单高效、准确性高、重复性好, 为衰老及衰老相关疾病的研究提供了技术手段。

• 单位
  中国医学科学院; 北京医院