miR-19b在人主动脉瓣间质细胞钙化中的作用

作者：杨濛; 丁辉^*

来源：检验医学, 2022, 37(05): 466-471.

• miR-19b
• 主动脉瓣间质细胞钙化
• 成骨分化

目的 探讨miR-19b在人主动脉瓣间质细胞(hVIC)钙化中的作用和机制。方法 使用含骨形态发生蛋白2(BMP-2)、地塞米松、抗维生素C和β-甘油磷酸的钙化培养液诱导hVIC细胞钙化(钙化模型组),通过Von Kossa染色鉴定模型是否构建成功,以未做处理的hVIC细胞作为对照组。根据转染质粒的不同,将hVIC细胞分为miR-19b空白对照(miR-NC)组、miR-19b过表达组、SMAD4过表达组、miR-19b和SMAD4同时过表达(miR-19b+SMAD4过表达)组。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组hVIC细胞miR-19b、转录受体相关转录因子-2(RUNX2)mRNA、骨钙素(OC)mRNA、SMAD1 mRNA、骨桥蛋白(OPN)mRNA和SMAD4 mRNA的相对表达量。采用免疫印迹法检测SMAD4蛋白的相对表达量。采用StarBase数据库预测miR-19b的下游靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果 钙化诱导后的hVIC细胞互相重叠生长,并表现出明显的聚集样生长趋势,细胞内钙化结节的数目明显增多(P<0.05),成骨相关因子RUNX2 mRNA、OC mRNA、SMAD1 mRNA和OPN mRNA的相对表达量明显升高(P<0.05)。钙化模型组miR-19b表达下调(P<0.05)。过表达miR-19b后hVIC细胞内RUNX2 mRNA、OC mRNA、SMAD1 mRNA和OPN mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证实SMAD4是miR-19b的下游靶基因。过表达SMAD4后hVIC细胞内RUNX2 mRNA、OC mRNA、SMAD1 mRNA和OPN mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),同时过表达miR-19b和SMAD4的hVIC细胞内成骨相关因子表达无变化(P>0.05)。结论 hVIC细胞钙化模型中miR-19b表达显著下调。miR-19b通过与下游靶基因SMAD4的靶向结合调控hVIC的钙化。miR-19b和SMAD4或可作为治疗主动脉瓣钙化疾病的潜在治疗靶标。

• 单位
  西安市第三医院