深黄被孢霉Δ5-脱饱和酶的原核表达及纯化

作者：朱祺; 于长青; 姚笛

来源：中国生物制品学杂志, 2013, (07): 923-926.

DOI：10.13200/j.cjb.2013.07.32.zhuq.002

• 深黄被孢霉
• Δ5-脱饱和酶
• 原核细胞
• 基因表达
• 纯化 Mortierella isabellina
• Δ5-Desaturase
• Prokaryotic cells
• Gene expression
• Purification

目的原核表达并纯化深黄被孢霉Δ5-脱饱和酶。方法采用RT-PCR技术扩增深黄被孢霉Δ5-脱饱和酶基因,插入表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-D5D,转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Ni2+-NTA纯化后,进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒pET-D5D经双酶切(NotⅠ/SalⅠ)和测序鉴定,证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为55 000,诱导6 h表达量较高,主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白可与兔抗Δ5-脱饱和酶多克隆抗体特异性结合。结论成功在E.coli中表达了深黄被孢霉Δ5-脱饱和...

• 单位
  黑龙江八一农垦大学